还原型上样缓冲液是 Western Blot（WB）蛋白样品处理的核心试剂，作用是使蛋白变性、解聚并带上均匀电荷，保证电泳时蛋白按分子量大小分离，同时避免蛋白高级结构对抗体识别的干扰。
蛋白上样缓冲液绝不是简单的“让样品沉底”，而是决定电泳成败的“蛋白驯化师”，所以选对低粘稠的蛋白上样缓冲液，让你蛋白定量的精准度更上一层楼，让你内参不齐的烦恼都走开，让你不再为WB实验发愁！
一、核心成分及作用
还原型上样缓冲液的关键特征是添加了还原剂，常用配方（以 5×Loading Buffer 为例）及成分功能如下：
还原剂的种类与区别
展开剩余64%EnkiLife(恩玑生命）基于传统蛋白上样缓冲液粘稠度高，蛋白制样取样时残留严重，以及较重刺激性气味的局限性，采用新型还原剂配方，不含β-巯基乙醇和DTT，全新推出无毒低粘稠的5*蛋白上样缓冲液（RA10055）。（注：本品含变性剂和还原剂，不适用于蛋白的非变性电泳和变性非还原电泳。）
二、EnkiLife(恩玑生命）5*蛋白上样缓冲液（RA10055）使用方法
1. 样品与缓冲液混合：按蛋白样品：还原型上样缓冲液 = 4:1 的比例混合（如 40 μL 样品 + 10 μL 5× 上样缓冲液）。
2. 加热变性：将混合液置于95–100℃金属浴 / 沸水浴中加热 10 min，使蛋白彻底变性解聚。
3. 样本冷却，离心处理：12000 rpm 离心 1 min，使样品中可能存在的沉淀聚集在管底，取上清上样电泳。
三、还原型 vs 非还原型上样缓冲液（关键区别）
四、注意事项
1. 传统蛋白上样缓冲液中的还原剂具有时效性：β- 巯基乙醇易氧化失效，建议分装保存并在使用前新鲜添加；DTT 溶液可分装后 - 20 ℃冻存，避免反复冻融。
2. 样品处理禁忌：还原条件下，不能用于检测依赖二硫键的构象型抗体，否则会导致抗体无法识别靶蛋白。
3. 浓度适配性：若蛋白样品浓度过高，可适当稀释缓冲液比例，避免 SDS 浓度过高影响电泳效果。
4. 保存条件：未添加还原剂的缓冲液可室温保存；含还原剂的缓冲液建议 4 ℃短期保存（1 周内），长期需 - 20 ℃分装冻存。
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